1.本發(fā)明涉及一種包含羊水干細胞或其衍生物的組成物，特別涉及一種包含源自偶蹄目動物的羊水干細胞或其衍生物的組成物。2.現(xiàn)有技術(shù)的描述皮膚是動物和人類抵御外界侵害的第一道屏障，其具有重要的物理和化學防御作用。此外，皮膚也是免疫防御的第一道防線。皮膚由以下三個主要層組成：表皮層、真皮層和皮下組織。該三個主要層含有特定細胞，且眾所周知隨著年齡的增長，皮膚的表皮層每天會脫落數(shù)百萬個細胞，產(chǎn)生細胞汰換的需求。此外，先驅(qū)細胞和干細胞增殖和分化，作為體內(nèi)自然修復和再生機制的一部分。然而，隨著老化，細胞的增殖可能無法跟上自然修復的速度，這時皺紋就會自然顯現(xiàn)出來。例如，隨著老化，皮膚皺紋、皮膚褶皺或皮膚隆起變得明顯，如眼角周圍的魚尾紋和面部的法令紋。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)膠原蛋白的流失是皺紋產(chǎn)生的主要原因之一。此外，皮膚細胞也可能因其他物理影響方式而受損，例如撕裂傷、擦傷、燙傷、糖尿病性潰瘍以及長期臥床引起的褥瘡等。傷口愈合是一個復雜而緩慢的過程，在治療過程中通過遷移和增殖形成新的上皮組織和結(jié)締組織。成年人的皮膚基本上以毛囊覆蓋，頭皮上覆蓋著大約100,000至150,000個毛囊。據(jù)信，隨著毛囊經(jīng)歷毛發(fā)產(chǎn)生、脫落、退化和新生長的周期，毛囊在其一生中會產(chǎn)生大約20個單獨的毛干。頭發(fā)具有許多重要的生理功能，例如抵御外部因子(包括紫外線輻射)、皮脂、頂漿汗液和費洛蒙的產(chǎn)生以及體溫調(diào)節(jié)。對于成年人的頭皮，在任何特定時間，大約80至90％都處于生長期；10至20％處于休止期為；及1至2％處于退化期。脫發(fā)是老年人群中的一個常見現(xiàn)象。已發(fā)現(xiàn)毛囊干細胞(hair?follicle?stem?cells，hfscs)對于刺激毛發(fā)生長/促進毛發(fā)生長非常重要?？赏瑫r通過內(nèi)生性和外源性訊號觸發(fā)hfscs的休眠和活化。干細胞分化不平衡和干細胞活性改變被認為是脫發(fā)過程中的重要因子。因此，有眾多有關(guān)可促進hfscs活化的治療的研究。眾所周知地，本領(lǐng)域中使用人類干細胞帶來許多問題，顯示在本領(lǐng)域中有強烈地需要進行進一步的研究探討這些問題。使用胚胎細胞帶來的一些主要障礙是倫理道德的疑問、遺傳缺陷的發(fā)生風險以及傳播病毒和致癌疾病的風險。因此，在本領(lǐng)域中對于消除上述困難的風險的來自干細胞株及/或其衍生物的組成物，以及將源自可靠來源的干細胞和/或其衍生物用于制備皮膚護理、促進毛發(fā)和化妝品的方法，尚有未滿足的需求。

背景技術(shù)：

0、發(fā)明背景

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是在于提供一種包含羊水干細胞或其衍生物的組成物及其用途，其包含干細胞或其衍生物和美容上或藥學上可接受的載體，且該干細胞源自偶蹄目動物的羊水。

2、本發(fā)明提供一種種組成物，其包含：干細胞或其衍生物；以及美容上或藥學上可接受的載體，其中，該干細胞源自偶蹄目動物的羊水。

3、在至少一實施例中，該偶蹄目動物包括但不限于豬、野豬、河馬、羚羊、鹿、長頸鹿、駱駝、美洲駝、羊駝、綿羊、山羊和牛。在部分實施例中，該偶蹄目動物為鹿。

4、在至少一實施例中，該干細胞的衍生物可為但不限于分泌體、條件培養(yǎng)基、外泌體、包外載體、分泌物質(zhì)或其任意組合。在部分實施例中，該衍生物為條件培養(yǎng)基。

5、在至少一實施例中，該干細胞對于cd31、cd34、cd45或其任意組合呈陰性。在部分實施例中，該干細胞源自鹿的羊水且對cd31、cd34和cd45呈陰性。

6、在至少一實施例中，該干細胞對cd9、cd29、cd44、cd73、cd90、cd105、nestin、sox2、nanog或其任意組合呈陽性。在部分實施例中，該干細胞源自鹿的羊水且對cd9、cd29、cd44、cd73、cd90、cd105、nestin、sox2和nanog呈陽性。

7、在至少一實施例中，該干細胞具有骨生成分化性、脂肪生成分化性、軟骨生成分化性或其任意組合。

8、在至少一實施例中，該組成物可為選自由凝膠、乳液、軟膏、乳化劑、糊劑、霜劑、注射制劑、膠囊、口服液、片劑、薄膜、錠劑、顆粒、噴霧劑及丸劑所組成的群組。

9、在至少一實施例中，該干細胞或其衍生物是組成物中的單一活性成分。

10、本發(fā)明另提供該組成物用于皮膚再生(skin?rejuvenation)或皮膚治療(skintreatment)的用途，其包括向有需要的個體施用有效量的本發(fā)明的組成物。在至少一實施例中，該用途可以是治療用途或非治療用途(例如：美容用途)。本發(fā)明還提供用于皮膚再生或皮膚治療的方法，其包括向有需要的個體施用有效量的本發(fā)明的組成物。此外，本發(fā)明提供用于皮膚再生或皮膚治療的組成物。本發(fā)明進一步提供該組成物于制備用于皮膚再生或皮膚治療的藥物的用途。

11、在至少一實施例中，本發(fā)明的組成物促進個體的膠原蛋白原(procollagen)、膠原蛋白(collagen)或彈性蛋白(elastin)的合成。

12、在至少一實施例中，該皮膚再生包括預防、治療或減少個體的皮膚上的年齡相關(guān)特征(age-related?feature)。在部分實施例中，該年齡相關(guān)特征可為但不限于：皺紋、老年斑、粗糙的皮膚紋理、皮膚暗沉、細紋、可見的毛孔、或由于膠原蛋白合成、彈性蛋白或細胞合成的減少而導致的皮膚結(jié)構(gòu)的損失。

13、在至少一實施例中，該皮膚治療包括恢復個體的皮膚的損傷、減少個體的受損皮膚的疤痕、在美容或皮膚科手術(shù)后增強個體的皮膚的恢復、或預防或減少個體的皮膚上的皺紋。

14、在部分實施例中，該皮膚治療包括控制、治療和/或預防疤痕形成、異常疤痕、異常傷口愈合、擴寬疤痕(widened?scar)、肥厚性疤痕(hypertrophied?scar)、蟹足腫(keloid)、蟹足腫疤痕或傷口愈合并發(fā)癥。

15、在進一步的實施例中，該皮膚治療包括初次愈合、傷口閉合、二次愈合、上皮化(epithelialization)、再上皮化(re-epithelialization)、三級傷口閉合或延遲初次閉合。

16、在其他實施例中，本發(fā)明所述組成物用于增加或減少個體施用部位的發(fā)炎期、增殖期、成熟期、止血、發(fā)炎、膠原蛋白、凝血、血栓素a2(thromboxane?a2)、前列腺素2a(prostaglandin?2a)、出血、血管舒張、組織胺、血小板、趨化因子(chemokine)、表皮生長因子(epidermal?growth?factor)、纖網(wǎng)蛋白(fibronectin)、纖維蛋白原(fibrinogen)、凝塊形成、血小板脫粒(platelet?degranulation)、膠原酶、纖維母細胞、膠原蛋白沉積或類胰島素生長因子。

17、在至少一實施例中，該皺紋是由年齡、肥胖、損傷、荷爾蒙不足、藥物副作用或其任意組合引起的。在至少一實施例中，該傷口是由割傷、燒傷、急性外傷、慢性創(chuàng)傷、手術(shù)傷口或其他化學或物理影響引起的。

18、本發(fā)明還提供該組成物用于促進毛發(fā)生長或預防脫發(fā)的用途，其包括向有需要的個體施用有效量的本發(fā)明的組成物。在至少一實施例中，該用途可以為治療用途或非治療用途(例如：美容用途)。本發(fā)明還提供用于促進毛發(fā)生長或預防脫發(fā)的方法，其包括向有需要的個體施用有效量的本發(fā)明的組成物。此外，本發(fā)明提供用于促進毛發(fā)生長或防止脫發(fā)的組成物。本發(fā)明進一步提供該組成物于制備用于促進毛發(fā)生長或防止脫發(fā)的藥物的用途。

19、在至少一實施例中，該脫發(fā)是選自由以下組成的群組的病癥引起：雄性禿、斑禿及休止期脫發(fā)。

20、在至少一實施例中，該組成物促進個體毛囊真皮乳頭細胞(hair?follicledermalpapilla?cell)的生長或遷移。

21、在至少一實施例中，該組成物是以局部、皮下、皮內(nèi)或肌內(nèi)施用于個體。在部分實施例中，該施用可通過直接注射、條件培養(yǎng)基或局部施用至選自由頭皮、面部、頸部、領(lǐng)口、胸部、背部、手臂、手、腿、足及腳底所組成的群組的一個或多個皮膚區(qū)域。

22、在至少一實施例中，該干細胞或其衍生物是本發(fā)明的組成物中的單一活性成分。

23、在至少一實施例中，本發(fā)明的組成物可以單獨使用或與以下組合使用：紗布、面膜、軟膏、塞子、化妝品組成物、美容上可接受的賦形劑或美容上可接受的載體、增稠劑、填充劑、保濕劑、乳化劑、濕潤劑、表面活性劑、緩沖劑或ph調(diào)節(jié)劑、成膜劑(film?formingagent)、防腐劑、抗氧化劑、香料、溶劑、推進劑(propellant)、著色劑或其任意組合。

24、在本發(fā)明的至少一實施例中，該偶蹄目動物的干細胞通過以下步驟獲得包含：

25、(a)通過羊膜穿刺術(shù)(amniocentesis)從偶蹄目動物中獲得羊水樣本；

26、(b)用無菌細胞過濾器過濾羊水；

27、(c)從羊水中離心并獲取干細胞；

28、(d)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)干細胞；

29、(e)去除未貼附的細胞，并允許貼附的細胞作為群落生長；且當貼附性細胞達到匯合時，

30、(f)胰蛋白酶化(trypsinizing)貼附的細胞，并傳代培養(yǎng)貼附的細胞以進行擴增或保存。

31、在本發(fā)明的一些實施例中，該鹿干細胞通過以下步驟獲得：

32、(a)通過羊膜穿刺術(shù)獲得鹿羊水樣本，在超音波引導下用長針注射器抽取羊水，其中，該母鹿懷孕3個月以上；

33、(b)用無菌細胞過濾器過濾新鮮鹿羊水，并以200×g離心羊水樣品至少5分鐘，并除去上清液；

34、(c)在培養(yǎng)基或市售干細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)鹿干細胞，其中，該培養(yǎng)基是補充有約10％至20％胎牛血清以及視需要地補充抗生素的α-改良的基本必需培養(yǎng)基(alpha-modified?minimum?essential?medium)；

35、(d)通過每周更換培養(yǎng)基兩次來去除未貼附的細胞，并使貼附的細胞生長為群落至少5至7天，直至達到80％至90％匯合；和

36、(e)胰蛋白酶化貼附性細胞，并以約1000至9000個細胞/cm2的接種密度，使貼附的細胞進行擴增。

37、在本發(fā)明的部分實施例中，該基礎培養(yǎng)基(basal?medium)可為mem、dmem、imdm、rpmi?1640。在本發(fā)明的部分實施例中，該α-修飾的基本必需培養(yǎng)基還補充有約4ng/ml堿性纖維母細胞生長因子(basic?fibroblast?growth?factor)。

38、在部分實施例中，該貼附的細胞為哺乳類動物貼附性細胞?？梢允褂萌魏谓臃N密度，其允許細胞立即或在培養(yǎng)一段時間后形成匯聚單層。在部分實施例中，該接種密度可為約10個細胞/cm2至約100,000個細胞/cm2、或約100個細胞/cm2至約75,000個細胞/cm2、或約500個細胞/cm2至約50,000個細胞/cm2、或約500個細胞/cm2至約10,000個細胞/cm2、或約500個細胞/cm2至約5,000個細胞/cm2、或約500個細胞/cm2至約2,500個細胞/cm2、或約1,000個細胞/cm2至約25,000個細胞/cm2、或約2,000個細胞/cm2至約10,000個細胞/cm2、或約3,000個細胞/cm2至約5000個細胞/cm2，但本發(fā)明不限于此。在部分實施例中，該貼附性細胞可為干細胞、體細胞、前驅(qū)細胞、成熟細胞和/或來自多個胚層的細胞，但本發(fā)明不限于此。

39、在本發(fā)明的部分實施例中，該必需培養(yǎng)基(essential?medium)可以補充抗生素，例如：青霉素(penicillin)、鏈霉素(streptomycin)、四環(huán)素(tetracyclines)和/或慶大霉素(gentamicin)，但本發(fā)明不限于此。

40、在本發(fā)明的部分實施例中，該必需培養(yǎng)基可以補充抗真菌劑，例如：多烯類(雙性霉素b(amphotericin?b))、氟胞嘧啶(flucytosine)、咪唑類(imidazoles)、三唑類(酮康唑(ketoconazole)、氟康唑(fluconazole)、伊曲康唑(itraconazole)和伏立康唑(voriconazole))、灰黃霉素和環(huán)吡酮，但本發(fā)明不限于此。

41、在至少一實施例中，該組成物可進一步包括麩酰胺酸、抗氧化劑和/或煙堿酰胺。在部分實施例中，該抗氧化劑可為維生素e、維生素a、維生素c或其任意組合。

42、在至少一實施例中，該源自羊水的干細胞相較于源自成體組織例如脂肪組織或骨髓的干細胞，在促進皮膚再生或皮膚治療、促進毛發(fā)生長或預防脫發(fā)方面帶來更好的功效。例如，在傷口愈合過程中，因為對肌纖維母細胞分化和膠原蛋白合成的促進作用，源自成體組織的干細胞可能會引起疤痕形成。相較之下，該羊水干細胞或其衍生物(例如，分泌體、條件培養(yǎng)基、外泌體、胞外載體或分泌物質(zhì))可以實現(xiàn)無疤痕傷口愈合，由于其通過抑制肌纖維母細胞分化和膠原蛋白合成，而具有抗纖維化特性。在部分實施例中，該dafsc相較于源自人類羊水的干細胞，在促進皮膚再生或皮膚治療、促進毛發(fā)生長或預防脫發(fā)方面表現(xiàn)出更優(yōu)異的功效。例如，該dafsc相較于來自人類其他組織的其他干細胞相比，其抑制更多的肌纖維母細胞分化和膠原蛋白合成。

43、在閱讀以下對各圖和圖式中例示的較佳實施例的詳細說明之后，本發(fā)明的這些和其他目的對于所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識的一般技術(shù)人員而言，無疑將變得可具體實施。