本發(fā)明涉及藥物濃度檢測，尤其是涉及一種液相質(zhì)譜固相萃取法檢測精神類藥物濃度的方法。

背景技術(shù)：

1、精神類藥物在臨床應(yīng)用廣泛，其在人體內(nèi)的濃度監(jiān)測對于治療效果評估及藥物安全性保障具有重要意義，現(xiàn)有檢測精神類藥物濃度的方法存在一定的局限性，例如，傳統(tǒng)的高效液相色譜法雖然能夠?qū)Σ糠志耦愃幬镞M行檢測，但在處理復雜生物樣本時，易受基質(zhì)效應(yīng)干擾，導致檢測靈敏度和準確性下降，而一些基于免疫分析的方法，特異性欠佳，可能出現(xiàn)交叉反應(yīng)，影響檢測結(jié)果的可靠性，液相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)結(jié)合了液相色譜的分離能力和質(zhì)譜的高靈敏度檢測優(yōu)勢，成為藥物濃度檢測的有力手段，但在實際應(yīng)用中，樣品前處理過程仍存在諸多問題，如常用的液液萃取法操作繁瑣、有機溶劑用量大，且易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，影響后續(xù)檢測效率和精度；固相萃取作為樣品前處理技術(shù)雖有一定優(yōu)勢，但現(xiàn)有固相萃取方法在提取精神類藥物時，提取效率仍有待提高，且對不同結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的精神類藥物適用性不夠廣泛，難以滿足同時檢測多種精神類藥物濃度的需求。

2、公告號cn112730686a的專利文件中公開了一種液相質(zhì)譜固相萃取法檢測精神類藥物濃度的方法，包括以下步驟：a、對待檢測樣品進行前處理；所述前處理具體采用固相萃取的方法進行；b、配制不同濃度的精神類藥物的標樣，然后進行液相質(zhì)譜檢測，并繪制標準曲線；c、對步驟a處理后得到的待檢測樣品進行液相質(zhì)譜檢測，即得所述精神類藥物濃度。本發(fā)明使用的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，它通過各類藥物質(zhì)核比不同來檢測藥物濃度，該方法特異性強，靈敏度高。

3、但是上述專利文件在精神類藥物濃度檢測過程中，存在的基質(zhì)干擾、提取效率低、適用范圍窄的問題，為此我們提出了一種液相質(zhì)譜固相萃取法檢測精神類藥物濃度的方法用于解決上述問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在精神類藥物濃度檢測過程中，存在的基質(zhì)干擾、提取效率低、適用范圍窄的問題的缺點，而提出的一種液相質(zhì)譜固相萃取法檢測精神類藥物濃度的方法。

2、本技術(shù)提供的一種液相質(zhì)譜固相萃取法檢測精神類藥物濃度的方法采用如下的技術(shù)方案：

3、一種液相質(zhì)譜固相萃取法檢測精神類藥物濃度的方法，包括以下步驟：

4、s1：選擇試劑與材料，并配置洗脫液；

5、s2：收集生物樣本，并對生物樣本進行預處理，得到澄清的樣本提取液；

6、s3：將處理后的樣本提取液加入固相萃取柱中進行吸附；

7、s4：對吸附過程進行實時監(jiān)測；

8、s5：對吸附后的固相萃取柱進行洗脫，并對洗脫液進行收集；

9、s6：對收集的洗脫液進行分析監(jiān)測，并進行效果評估；

10、s7：將濃縮后的樣品溶液注入液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中進行檢測；

11、s8：計算生物樣本中精神類藥物的準確濃度，并進行數(shù)據(jù)處理和分析。

12、進一步地，所述s1中，選擇高純度、特定粒徑(如3-10μm)范圍的填料，其表面化學鍵合有混合模式官能團(如離子交換基團和反相色譜基團)，例如，填料表面含有羧酸基團(用于離子交換)和c18疏水鏈(用于反相吸附)，可在特定ph條件下同時捕獲精神類藥物的電離部分和疏水部分，選擇與目標藥物結(jié)構(gòu)相似但質(zhì)譜特征離子不同的內(nèi)標(如氘代精神類藥物)，配制成100μg/ml的儲備液，存儲溫度為-20℃。

13、進一步地，所述s1中，配置專用洗脫液，包含以下組分：甲醇或乙腈：70-90％v/v，用于破壞藥物與填料的疏水作用；甲酸銨：10mm，用于調(diào)節(jié)離子強度；甲酸：0.1％，用于維持ph3.0-4.0，確保藥物部分電離；表面活性劑：0.05％，用于輔助解吸強吸附藥物，對洗脫液進行過濾除菌(0.22μm濾膜)并超聲脫氣。

14、進一步地，所述s2中，通過收集機構(gòu)收集生物樣本，置于含有抗凝劑(如肝素鈉)的離心管中，在溫度為4℃條件下保存，避免降解，向1ml生物樣本中加入3ml乙腈(含0.1％甲酸)，通過渦旋振蕩器混勻后，收集上清液，渦旋振蕩器轉(zhuǎn)速為10,000rpm，離心時間為10min，將上清液通過0.45μm濾器，得到澄清樣本提取液，置于冰浴中備用，向樣本提取液中加入磷酸鹽緩沖液(ph7.0-8.0)，調(diào)節(jié)混合液ph至6.5-7.5，確保藥物電離狀態(tài)適合吸附。

15、進一步地，所述s3中，用5ml甲醇和5ml平衡液(如0.1％甲酸水溶液)依次通過萃取柱，活化填料，將預處理后的樣本提取液緩慢加入固相萃取柱，流速為1-2ml/min，確保藥物分子與填料充分接觸吸附，吸附溫度為4℃-25℃，避免高溫導致藥物降解或非特異性吸附。

16、進一步地，所述s4中，在固相萃取柱出口端連接紫外檢測器，波長為210-280nm，監(jiān)測流出液的吸光度變化，當吸光度降至基線水平(表明藥物不再流出)，吸附過程完成。

17、進一步地，所述s5中，用0.5ml預處理液(如5％甲醇水溶液)快速沖洗柱子，去除弱吸附雜質(zhì)，緩慢注入1.5ml配制好的洗脫液，流速為0.5-1ml/min，初始階段保持低流速以充分解吸藥物，根據(jù)流出液的紫外信號，動態(tài)調(diào)整洗脫液溫度(25℃-40℃)和流速，避免藥物峰展寬，采用分段收集(每0.5ml為一段)，收集洗脫液至標記好的離心管中。

18、進一步地，所述s6中，通過用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀快速分析每段洗脫液的藥物濃度和純度，測定洗脫液的ph值(應(yīng)為3.0-4.0)和電導率(<10ms/cm)，評估洗脫效率，計算藥物回收率(目標值>85％)和純度(雜質(zhì)含量<5％)，若回收率低，檢查洗脫液成分或流速；若純度不足，優(yōu)化預處理步驟。

19、進一步地，所述s7中，用氮吹儀在40℃下將洗脫液濃縮至100μl，避免高溫破壞藥物，液相色譜條件：色譜柱：c18柱(150mm×2.1mm，3μm)；流動相：a相為0.1％甲酸水溶液，b相為乙腈；梯度洗脫：0-2min(20％b)，2-8min(20％-80％b)，流速0.3ml/min；質(zhì)譜條件：電噴霧離子源(esi+模式)，噴霧電壓3.5kv；定量離子：選擇藥物分子的[m+h]+離子(如m/z300)；內(nèi)標離子：選擇內(nèi)標分子的特征離子(如m/z305)。

20、進一步地，所述s8中，根據(jù)待測藥物與內(nèi)標物質(zhì)的質(zhì)譜信號比值(如峰面積比)，結(jié)合標準曲線方程y＝kx+b，r2>0.99，計算樣本中藥物濃度，使用watersquanlynx對原始數(shù)據(jù)進行積分、校正和統(tǒng)計分析，評估檢測限(lod，信噪比3:1)和定量限(loq，信噪比10:1)，確保方法靈敏度滿足臨床需求。

21、綜上所述，本技術(shù)包括以下至少一種有益技術(shù)效果：

22、1.本方案通過優(yōu)化固相萃取柱填料的化學組成和結(jié)構(gòu)，以及精心配制的專用洗脫液，能夠有效提高精神類藥物的提取效率和純度，洗脫液的成分設(shè)計能夠充分破壞藥物與填料之間的作用力，確保藥物分子的高效洗脫，從而提高檢測的靈敏度和準確性；

23、2.本方案通過調(diào)節(jié)洗脫液的ph值、離子強度和有機溶劑比例，可以有效應(yīng)對不同藥物的極性和結(jié)合特性，實現(xiàn)對多種精神類藥物的同時檢測；

24、3.本方案通過自動化監(jiān)測吸附過程和動態(tài)調(diào)整洗脫條件，減少了人工操作的復雜性和誤差，洗脫液的分段收集和實時監(jiān)測設(shè)計，不僅提高了藥物的回收率和純度，還便于快速評估洗脫效果并進行優(yōu)化，此外，氮吹濃縮步驟和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的自動化分析功能，進一步提高了整個檢測流程的效率，使其更加適合高通量的臨床樣本分析。

25、本發(fā)明通過固相萃取技術(shù)和液相質(zhì)譜聯(lián)用方法，有效避免了基質(zhì)干擾、提取效率低和適用范圍窄的問題，為精神類藥物的臨床監(jiān)測和藥物研發(fā)提供了高效、準確、可靠的分析手段。