本發(fā)明涉及醫(yī)用生物材料，具體而言，涉及一種纖維蛋白原凝膠、制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、目前，包括市面上在售的gelma等凝膠都只能模擬matrigel的一種凝膠基底作為一種結(jié)構(gòu)彈性支撐材料，實(shí)際使用過程中仍然需要添加各種生長因子，而生長因子普遍價(jià)格昂貴，制備成本高，因此，現(xiàn)有的生物凝膠存在制備成本高、制備過程復(fù)雜的問題。

2、matrigel是從富含胞外基質(zhì)蛋白的ehs小鼠腫瘤中提取的基底膜基質(zhì)，其主要成分有層粘連蛋白，ⅳ型膠原，硫酸肝素糖蛋白，巢蛋白，還包含多種生長因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。在室溫條件下，matrigel聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì)，模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化，可用于對細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)等的研究。市售matrigel雖然可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞4～12h貼壁，4～12h成血管，但仍沒有公開技術(shù)表明其具體提取工藝。此外，matrigel是從富含胞外基質(zhì)蛋白的ehs小鼠腫瘤中提取的基底膜基質(zhì)(或基底膜分泌物)，其存在原材料獲取成本高，富集成本難，人工合成和富集難度高的問題。

3、而人工模擬基質(zhì)膠以peg/pva及其衍生物為主要材料，每一種peg的衍生物的制備都需要一些不同的粘附分子結(jié)合，制備的試劑特殊。

4、鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種纖維蛋白原凝膠、制備方法及其應(yīng)用以低成本、簡單地制備優(yōu)秀粘附性能和促血管生成的纖維蛋白原凝膠。

2、本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：

3、第一方面，本發(fā)明提供了一種纖維蛋白原凝膠，其通過如下方法制備：

4、i：按照如下(1)和/或(2)的方法制備纖維蛋白原溶液：

5、(1)：將凝血完成的牛全血進(jìn)行離心獲得去細(xì)胞的血清，將血清于0-5℃靜置7d-20d，收集靜置過程中析出的第一沉淀物；取上清液反復(fù)凍融，收集凍融過程中析出的第二沉淀物；合并第一沉淀物和第二沉淀物，溶解獲得纖維蛋白原溶液；

6、(2)：對添加有抗凝劑的牛全血進(jìn)行離心，取上清液反復(fù)凍融，收集第三沉淀物，溶解獲得纖維蛋白原溶液；

7、ii：將纖維蛋白原溶液、牛脫細(xì)胞小腸溶液與凝血酶混合，固化制得纖維蛋白原凝膠；

8、纖維蛋白原溶液、牛脫細(xì)胞小腸溶液與凝血酶的混合比例為25-1000mg：25-1000mg：1-5u。

9、第二方面，本發(fā)明提供了纖維蛋白原凝膠的制備方法，其包括如下步驟：

10、i：按照如下(1)和/或(2)的方法制備纖維蛋白原溶液：

11、(1)：將凝血完成的牛全血進(jìn)行離心獲得去細(xì)胞的血清，將血清于0-5℃靜置7d-20d，收集靜置過程中析出的第一沉淀物；取上清液反復(fù)凍融，收集凍融過程中析出的第二沉淀物；合并第一沉淀物和第二沉淀物，溶解獲得纖維蛋白原溶液；

12、(2)：對添加有抗凝劑的牛全血進(jìn)行離心，取上清液反復(fù)凍融，收集第三沉淀物，溶解獲得纖維蛋白原溶液；

13、ii：將纖維蛋白原溶液、牛脫細(xì)胞小腸溶液與凝血酶混合，固化制得纖維蛋白原凝膠；

14、纖維蛋白原溶液、牛脫細(xì)胞小腸溶液與凝血酶的混合比例為25-1000mg：25-1000mg：1-5u。

15、第三方面，本發(fā)明提供了纖維蛋白原凝膠在如下至少一項(xiàng)中的應(yīng)用：

16、體外細(xì)胞培養(yǎng)、體外細(xì)胞分化、仿生材料、藥物篩選、細(xì)胞模型構(gòu)建、類器官或器官模型構(gòu)建和病原體侵染宿主細(xì)胞。

17、第四方面，本發(fā)明提供了一種細(xì)胞培養(yǎng)基或仿生材料，其包括上述的纖維蛋白原凝膠。

18、第五方面，本發(fā)明提供了一種體外促血管生成的方法，將待培養(yǎng)細(xì)胞接種于鋪有上述的纖維蛋白原凝膠的培養(yǎng)容器中，添加培養(yǎng)基。

19、本發(fā)明具有以下有益效果：

20、本發(fā)明提供的纖維蛋白原凝膠具有原材料來源廣、成本低的技術(shù)優(yōu)勢，取材方便易得。可以低成本、簡單地制備纖維蛋白原凝膠。

21、經(jīng)過測試，本發(fā)明提供的纖維蛋白原凝膠具有優(yōu)秀的粘附性能和促血管生成的特性。相比于現(xiàn)有的化學(xué)合成基質(zhì)膠，如gelma，在不額外添加細(xì)胞因子時(shí)，無法使huvec細(xì)胞成血管。而本發(fā)明提供的纖維蛋白原凝膠，在無需額外添加細(xì)胞因子就可直接促血管生成，且表現(xiàn)出＜12h貼壁，＜12h的成血管趨勢。具有良好的生物學(xué)特性。

22、此外，本發(fā)明提供的纖維蛋白原凝膠的纖維蛋白原富集難度低，具有巨大的工業(yè)化應(yīng)用前景?？捎糜谟隗w外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化，可用于對細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)等的研究。

1.一種纖維蛋白原凝膠，其特征在于，其通過如下方法制備：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維蛋白原凝膠，其特征在于，所述牛全血為胎牛全血和/或新生牛全血。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維蛋白原凝膠，其特征在于，所述牛脫細(xì)胞小腸溶液選自新生牛的脫細(xì)胞小腸溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維蛋白原凝膠，其特征在于，所述纖維蛋白原溶液、牛脫細(xì)胞小腸溶液與凝血酶的混合比例為100mg：100mg：1u；

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維蛋白原凝膠，其特征在于，所述方法(1)中的離心條件為500-2000rpm，離心10-20min；

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維蛋白原凝膠，其特征在于，所述固化的條件是將所述纖維蛋白原溶液、牛脫細(xì)胞小腸溶液與凝血酶混合物置于37℃下30-120min，倒置凝膠培養(yǎng)板，凝膠不會滑動或者掉落為止。

7.如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的纖維蛋白原凝膠的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟：

8.如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的纖維蛋白原凝膠在如下至少一項(xiàng)中的應(yīng)用：

9.一種細(xì)胞培養(yǎng)基或仿生材料，其特征在于，其包括權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的纖維蛋白原凝膠。

10.一種體外促血管生成的方法，其特征在于，將待培養(yǎng)細(xì)胞接種于鋪有權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的纖維蛋白原凝膠的培養(yǎng)容器中，添加培養(yǎng)基。