本發(fā)明涉及生物，具體涉及一種靶向actriib的納米抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、肌肉生長抑制素(myostatin，mstn)為tgf-β超家族成員，又稱為gdf-8(growth/differentiation?factor?8)。它是骨骼肌細(xì)胞分泌的高度保守的一種功能性糖蛋白，雖說源于肌肉，但其靶器官并非只限于肌肉，在正常生理?xiàng)l件下，mstn不但抑制骨骼肌細(xì)胞的生長發(fā)育，同時(shí)可能還參與脂肪的生長、分化和代謝調(diào)控。

2、激活素受體b(actriib或acvr2b)是肌肉生長抑制素mstn的受體，當(dāng)mstn與actriib的結(jié)合受到抑制或阻斷時(shí)，骨骼肌的誘導(dǎo)分化受到調(diào)控。actriia同樣對肌肉分化生長有不同程度的調(diào)控作用。除mstn以外，其他ii型受體的配體如activin?a和gdf11等同樣對肌肉生長的抑制有貢獻(xiàn)。

3、早在2001年se-jin?lee等(pnas，2001，vol.98no.16,9306–9311)就在小鼠模型中觀察到抗mstn抗體可增加小鼠肌肉質(zhì)量。諾瓦提斯(novartis?ag)公司的actriib抗體bym338是一個(gè)igg1同種型抗體。

4、目前并沒有安全、有效調(diào)控骨骼肌分化的產(chǎn)品，出于預(yù)防或治療的目的，需要開發(fā)增加人體肌肉質(zhì)量，改善肌肉力量，改善代謝能力的產(chǎn)品及其使用方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明第一方面提供一種納米抗體，其包括含cdr1、cdr2和cdr3的重鏈可變區(qū)，并具有識(shí)別并結(jié)合actriib的功能。

2、本發(fā)明還提供一種actriib結(jié)合分子，包含抗actriib單域抗體(vhh)，所述單域抗體的互補(bǔ)決定區(qū)cdr包含cdr1、cdr2和cdr3，其中，cdr1具有seq?id?no:6所示的序列，cdr2具有seq?id?no:7所示的序列，cdr3具有seq?id?no:8所示的序列。

3、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述單域抗體的fr1具有seq?id?no:1所示的vhh的fr1。

4、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述單域抗體的fr2具有seq?id?no:1所示的vhh的fr2。

5、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述單域抗體的fr3具有seq?id?no:1中所示的vhh的fr3。

6、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述單域抗體的fr4具有seq?id?no:1中所示的vhh的fr4。

7、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述單域抗體具有如seq?id?no:1所示的氨基酸序列，或與如seq?id?no:1所示的氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。

8、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述actriib結(jié)合分子是包含一條、兩條或多條所述單域抗體的單價(jià)或多價(jià)單域抗體、多特異性單域抗體、重鏈抗體或其抗原結(jié)合片段。

9、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述多價(jià)單域抗體或多特異性單域抗體通過連接子連接多個(gè)單域抗體。所述連接子由選自g和s的1-15個(gè)氨基酸組成。

10、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述重鏈抗體的抗原結(jié)合片段是vhh。

11、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述actriib結(jié)合分子是重鏈抗體，包含具有ch2和ch3的重鏈恒定區(qū)。

12、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述重鏈抗體是駱駝重鏈抗體或軟骨魚重鏈抗體。

13、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述重鏈恒定區(qū)是人的重鏈恒定區(qū)，優(yōu)選地，所述重鏈恒定區(qū)是人igg1的重鏈恒定區(qū)。

14、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述重鏈抗體的ch2和ch3是人igg1?fc的ch2和ch3。

15、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述重鏈恒定區(qū)如seq?id?no:4所示，或與如seq?idno:4所示的氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。

16、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述actriib結(jié)合分子、單域抗體或重鏈抗體為嵌合抗體。

17、本發(fā)明還提供一種核酸分子，其編碼

18、(1)本文任一實(shí)施方案所述actriib結(jié)合分子，和/或

19、(2)(1)的互補(bǔ)序列。

20、本發(fā)明還提供一種核酸構(gòu)建物，包含本文所述的核酸分子。

21、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸構(gòu)建物是克隆載體、表達(dá)載體或整合載體，優(yōu)選地，所述表達(dá)載體的骨架為pcdna3.4。

22、本發(fā)明還提供一種宿主細(xì)胞，選自：

23、(1)表達(dá)和/或分泌本文任一實(shí)施方案所述actriib結(jié)合分子；

24、(2)包含本文所述的核酸分子；和/或

25、(3)包含本文所述的核酸構(gòu)建物。

26、本發(fā)明還提供一種制備本文任一實(shí)施方案所述actriib結(jié)合分子的方法，包括：在適合產(chǎn)生actriib結(jié)合分子的條件下培養(yǎng)本文所述的宿主細(xì)胞，和任選的從培養(yǎng)物中純化所述actriib結(jié)合分子。

27、本發(fā)明還提供一種藥物組合物，包含本文任一實(shí)施方案所述actriib結(jié)合分子、核酸分子、核酸構(gòu)建物或宿主細(xì)胞，和藥學(xué)上可接受的輔料。

28、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物用于減少動(dòng)物脂肪含量和/或增加動(dòng)物肌肉含量。

29、本發(fā)明還提供本文任一實(shí)施方案所述actriib結(jié)合分子、核酸分子、核酸構(gòu)建物或宿主細(xì)胞在制備用于減少動(dòng)物脂肪含量和/或增加動(dòng)物肌肉含量的藥物或試劑盒中的用途。

30、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述動(dòng)物是哺乳動(dòng)物，優(yōu)選地，所述動(dòng)物是小鼠或人。

31、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述動(dòng)物患有肥胖或代謝疾病，例如糖尿病。

32、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述脂肪是皮下脂肪和/或腹腔脂肪。

33、本發(fā)明還提供一種減少動(dòng)物脂肪含量和/或增加動(dòng)物肌肉含量的方法，所述方法包括給予需要的患者治療有效量的本發(fā)明任一實(shí)施方案所述的actriib結(jié)合分子、核酸分子、核酸構(gòu)建物、宿主細(xì)胞或藥物組合物。

34、本發(fā)明還提供一種檢測actriib的試劑盒，包含本發(fā)明任一實(shí)施方案所述的actriib結(jié)合分子、核酸分子、核酸構(gòu)建物或宿主細(xì)胞。

35、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑盒還包括用于檢測actriib與actriib結(jié)合分子的結(jié)合的試劑。例如通過酶聯(lián)免疫反應(yīng)法檢測所述結(jié)合的試劑。

36、在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述檢測結(jié)合試劑是能與actriib結(jié)合分子連接的可檢測標(biāo)記物，例如生物素。所述的可檢測標(biāo)記物被連接于所述actriib結(jié)合分子或分離地存在于試劑盒中。

37、本發(fā)明還提供一種檢測樣品中actriib存在情況的非診斷性方法，所述方法包括：以本文任一實(shí)施方案所述actriib結(jié)合分子與樣品孵育，和檢測actriib與actriib結(jié)合分子的結(jié)合，從而確定樣品中actriib存在情況。所述檢測是酶聯(lián)免疫反應(yīng)法檢測。

38、本發(fā)明還提供本文任一實(shí)施方案所述actriib結(jié)合分子在制備用于檢測樣品中actriib的試劑盒中的用途。