本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及溶瘤病毒m1增效組合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、溶瘤病毒(oncolytic?virus，ov)是一類可以選擇性地感染并殺傷腫瘤細(xì)胞而不影響正常細(xì)胞的病毒，因其獨(dú)特的腫瘤特異性及免疫激活作用，近年來(lái)在癌癥治療領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注。溶瘤病毒治療通過(guò)多種機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用，包括直接裂解腫瘤細(xì)胞、激活宿主的免疫反應(yīng)，以及誘導(dǎo)腫瘤微環(huán)境的改變等。理論上，溶瘤病毒具有顯著的治療潛力，尤其在靶向特異性強(qiáng)、對(duì)健康組織傷害小的情況下，可為癌癥患者提供新的治療選擇。

2、然而，盡管溶瘤病毒療法在理論上表現(xiàn)出強(qiáng)大的臨床應(yīng)用前景，實(shí)際應(yīng)用中仍然面臨一系列挑戰(zhàn)。首先，溶瘤病毒在癌細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制能力往往受到限制，這直接影響了病毒的治療效能。具體來(lái)說(shuō)，溶瘤病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后，可能會(huì)被宿主的免疫系統(tǒng)識(shí)別并引發(fā)抗病毒免疫反應(yīng)。免疫系統(tǒng)通過(guò)釋放抗病毒細(xì)胞因子、激活免疫細(xì)胞等手段，抑制病毒的進(jìn)一步復(fù)制和擴(kuò)散，這在一定程度上降低了病毒的治療效果。此外，溶瘤病毒在腫瘤細(xì)胞內(nèi)部的復(fù)制也可能遭遇腫瘤細(xì)胞的多重抵抗機(jī)制，包括病毒復(fù)制途徑的封鎖、細(xì)胞凋亡抗性增強(qiáng)以及對(duì)病毒感染的抑制等。這些因素共同作用，導(dǎo)致了溶瘤病毒療法在臨床治療中的應(yīng)用受限。

3、在此背景下，尋找有效的策略來(lái)增強(qiáng)溶瘤病毒的復(fù)制能力并提高其療效成為研究的重點(diǎn)之一。近年來(lái)，甲病毒m1被發(fā)現(xiàn)是一種具有高度腫瘤特異性的溶瘤病毒，具有較好的溶瘤效應(yīng)和免疫激活作用。2014年，申請(qǐng)人首次鑒定并報(bào)告了甲病毒m1的溶瘤特性(procnatl?acad?sci?u?s?a.2014；111(42):e4504-e4512.)，并進(jìn)一步推動(dòng)其在中國(guó)、日本等地開展了相關(guān)的i期臨床試驗(yàn)(臨床試驗(yàn)編號(hào)：cxsl2300588、cxsl2400590、jrct2063230079)。此外，甲病毒m1在美國(guó)已獲得fda的孤兒藥資格認(rèn)證，顯示出其在癌癥治療中的巨大潛力。

4、低分子肝素(low?molecular?weight?heparin，lmwh)是一種常用的抗凝藥物，廣泛用于預(yù)防血栓形成、治療靜脈血栓栓塞以及心肌梗塞等疾病。與傳統(tǒng)肝素相比，低分子肝素具有更好的生物利用度和更為穩(wěn)定的抗凝效果。在這一類藥物中，依諾肝素鈉因其較低的出血風(fēng)險(xiǎn)和較高的生物利用度，已成為臨床實(shí)踐中的首選藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明第一方面的目的，在于提供低分子肝素或其藥學(xué)上可接受的鹽的應(yīng)用。

2、本發(fā)明第二方面的目的，在于提供一種產(chǎn)品。

3、本發(fā)明第三方面的目的，在于提供本發(fā)明第二方面的產(chǎn)品在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

4、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

5、為了增強(qiáng)溶瘤病毒在癌細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制能力，申請(qǐng)人的研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)行了深入的探索。經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的探索和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，我們發(fā)現(xiàn)低分子肝素能夠影響溶瘤病毒在癌細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制過(guò)程，兩者的聯(lián)合應(yīng)用呈現(xiàn)出積極的效果，開辟了溶瘤病毒療法優(yōu)化的新方向，為提高治療效果提供了新的可能性。

6、本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供低分子肝素或其藥學(xué)上可接受的鹽在(1)～(6)中任一項(xiàng)中的應(yīng)用：

7、(1)制備增強(qiáng)溶瘤病毒的抗腫瘤效果的產(chǎn)品；

8、(2)提高溶瘤病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞的粘附能力；

9、(3)制備提高溶瘤病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞粘附能力的產(chǎn)品；

10、(4)提高溶瘤病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞感染的噬斑數(shù)量；

11、(5)制備提高溶瘤病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞感染的噬斑數(shù)量的產(chǎn)品；

12、(6)制備增加腫瘤組織中溶瘤病毒的病毒量的產(chǎn)品。

13、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述腫瘤包括膀胱癌、前列腺癌、腦膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌和胰腺癌中的至少一種；優(yōu)選為膀胱癌。

14、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述低分子肝素為分子量小于7000da的肝素片段。

15、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述低分子肝素包括依諾肝素鈉、那屈肝素鈉、達(dá)肝素鈉、速碧林中的至少一種；優(yōu)選為依諾肝素鈉。

16、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述溶瘤病毒包括蓋塔病毒、腺病毒、單純性皰疹病毒、呼腸孤病毒、麻疹病毒、新城疫病毒、塞內(nèi)加谷病毒、水皰性口炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、echo腸道病毒、柯薩奇病毒和牛痘病毒中的至少一種。

17、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述溶瘤病毒為溶瘤病毒m1。

18、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述低分子肝素或其藥學(xué)上可接受的鹽通過(guò)增加溶瘤病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞的粘附能力，以達(dá)到增強(qiáng)溶瘤病毒的抗腫瘤效果的目的。

19、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述藥學(xué)上可接受的鹽包括金屬鹽、銨鹽、與無(wú)機(jī)酸形成的鹽、與有機(jī)堿形成的鹽、與有機(jī)酸形成的鹽、與堿性氨基酸形成的鹽、與酸性氨基酸形成的鹽中的至少一種。

20、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述金屬鹽包括堿金屬鹽、堿土金屬鹽。

21、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述堿金屬鹽包括鈉鹽、鉀鹽中的至少一種。

22、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述堿土金屬鹽包括鈣鹽、鎂鹽、鋇鹽、鋁鹽中的至少一種。

23、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述與有機(jī)堿形成的鹽包括與下列有機(jī)堿形成的鹽：三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、環(huán)己胺、二環(huán)己基胺、n,n'-二芐基乙二胺中的至少一種。

24、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述與無(wú)機(jī)酸形成的鹽包括與下列無(wú)機(jī)酸形成的鹽：鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸中的至少一種。

25、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述與有機(jī)酸形成的鹽包括與下列有機(jī)酸形成的鹽：甲酸、乙酸、三氟乙酸、苯二酸、富馬酸、草酸、酒石酸、馬來(lái)酸、枸櫞酸、琥珀酸、蘋果酸、甲磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸中的至少一種。

26、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述與堿性氨基酸形成的鹽包括與下列堿性氨基酸形成的鹽：精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸中的至少一種。

27、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述與酸性氨基酸形成的鹽包括與下列酸性氨基酸形成的鹽：門冬氨酸、谷氨酸中的至少一種。

28、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述產(chǎn)品包括試劑、試劑盒和藥物。

29、本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供一種產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包括低分子肝素或其藥學(xué)上可接受的鹽和溶瘤病毒。

30、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述產(chǎn)品中的低分子肝素或其藥學(xué)上可接受的鹽的有效劑量為0.16～2.56iu/ml。

31、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述產(chǎn)品中的溶瘤病毒的有效劑量為0.01～2moi。

32、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述產(chǎn)品中的溶瘤病毒的有效劑量為0.01～1moi。

33、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述低分子肝素為分子量小于7000da的肝素片段。

34、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述低分子肝素包括依諾肝素鈉、那屈肝素鈉、達(dá)肝素鈉、速碧林中至少一種；優(yōu)選為依諾肝素鈉。

35、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述溶瘤病毒包括蓋塔病毒、腺病毒、單純性皰疹病毒、呼腸孤病毒、麻疹病毒、新城疫病毒、塞內(nèi)加谷病毒、水皰性口炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、echo腸道病毒、柯薩奇病毒和牛痘病毒中至少一種。

36、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述溶瘤病毒為溶瘤病毒m1。

37、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述藥學(xué)上可接受的鹽包括金屬鹽、銨鹽、與無(wú)機(jī)酸形成的鹽、與有機(jī)堿形成的鹽、與有機(jī)酸形成的鹽、與堿性氨基酸形成的鹽、與酸性氨基酸形成的鹽中的至少一種。

38、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述藥物還可以含有藥學(xué)上可接受的輔料，如溶劑、拋射劑、增溶劑、助溶劑、乳化劑、著色劑、粘合劑、崩解劑、填充劑、潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、助流劑、矯味劑、防腐劑、助懸劑、包衣材料、芳香劑、抗黏合劑、整合劑、滲透促進(jìn)劑、ph值調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、增塑劑、表面活性劑、發(fā)泡劑、消泡劑、增稠劑、包合劑、保濕劑、吸收劑、稀釋劑、絮凝劑與反絮凝劑、助濾劑、釋放阻滯劑、載體中的至少一種。

39、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述藥物還可以含有聯(lián)用藥物，所述藥物可用于治療腫瘤。

40、本發(fā)明的第三個(gè)方面，提供本發(fā)明第二方面的產(chǎn)品在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

41、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述腫瘤包括膀胱癌、前列腺癌、腦膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌和胰腺癌中的至少一種。

42、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述藥物還可以含有藥學(xué)上可接受的輔料，如溶劑、拋射劑、增溶劑、助溶劑、乳化劑、著色劑、粘合劑、崩解劑、填充劑、潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、助流劑、矯味劑、防腐劑、助懸劑、包衣材料、芳香劑、抗黏合劑、整合劑、滲透促進(jìn)劑、ph值調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、增塑劑、表面活性劑、發(fā)泡劑、消泡劑、增稠劑、包合劑、保濕劑、吸收劑、稀釋劑、絮凝劑與反絮凝劑、助濾劑、釋放阻滯劑、載體中的至少一種。

43、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，為了便于用藥，可將活性成分與任何一種或者幾種藥學(xué)上可以接受的輔料加工成特定的劑型。這些輔料可以是稀釋劑(例如淀粉、預(yù)膠化淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、甘露醇以及微晶纖維素等)、吸收劑(例如硫酸鈣、磷酸氫鈣、輕質(zhì)氧化鎂以及碳酸鈣等)、潤(rùn)濕劑(例如水以及乙醇等)、粘合劑(例如羥丙甲纖維素、聚維酮、淀粉漿以及糖漿等)、崩解劑(例如干淀粉、羥甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、泡騰崩解劑以及交聯(lián)聚維酮等)、潤(rùn)滑劑(硬脂酸鎂、滑石粉、氫化植物油、聚乙二醇以及微粉硅膠等)、著色劑(例如二氧化鈦、日落黃、亞甲藍(lán)以及藥用氧化鐵等)、包衣材料(例如丙烯酸樹脂、羥丙甲纖維素以及聚維酮等)、溶劑(例如注射用水、乙醇、丙二醇以及甘油等)、酸堿調(diào)節(jié)劑(例如鹽酸、乳酸、氫氧化鈉、酒石酸以及酒石酸鈉等)、抗氧劑(例如亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉以及硫代硫酸鈉等)、抑菌劑(例如苯酚、苯甲醇以及硫柳汞等)，也可以是等滲調(diào)節(jié)劑(例如氯化鈉以及葡萄糖等)。

44、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述產(chǎn)品的劑型包括經(jīng)胃腸道給藥劑型、或非經(jīng)胃腸道給藥劑型。

45、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述經(jīng)胃腸道給藥劑型包括散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、緩釋劑、溶液劑、干混懸劑、泡騰片、乳劑、混懸劑、糖漿劑、滴劑、咀嚼片中的至少一種。

46、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述經(jīng)腸胃道給藥劑型包括但不限于腸溶片、包衣片、薄膜衣片、糖衣片、分散片、吸吮片、咀嚼片、泡騰片、劃痕片、緩釋控釋劑型緩釋片、緩釋包衣片、控釋片口腔崩解片、含片、口腔貼片等。

47、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述非經(jīng)胃腸道給藥劑型包括注射給藥劑型、呼吸道給藥劑型、皮膚給藥劑型、黏膜給藥劑型、腔道給藥劑型中的至少一種。

48、在本發(fā)明一些實(shí)施方式中，所述注射給藥劑型包括但不限于注射液、注射用溶液劑、靜脈滴注用注射液、注射用混懸液、注射用無(wú)菌粉末、靜脈注射針劑、水針、注射用乳劑、粉針劑、針劑、無(wú)菌粉針、凍干粉針等。

49、本發(fā)明的有益效果是：

50、本發(fā)明首次提出通過(guò)低分子肝素增加溶瘤病毒m1在治療腫瘤的治療效果的技術(shù)方案，低分子肝素(如依諾肝素)能夠影響溶瘤病毒在癌細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制過(guò)程，兩者的聯(lián)合應(yīng)用呈現(xiàn)出積極的效果，開辟了溶瘤病毒療法優(yōu)化的新方向，為提高治療效果提供了新的可能性。

51、具體地，通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，0.16～2.56iu/ml的依諾肝素能顯著促進(jìn)溶瘤病毒m1的感染和殺傷，提高了溶瘤病毒m1對(duì)膀胱癌細(xì)胞的粘附能力，增強(qiáng)溶瘤病毒m1對(duì)膀胱癌的治療效果。